Caracterização funcional de proteínas hipotéticas de Leptospira interrogans como adesinas e potenciais antígenos vacinais e para diagnóstico / Functional characterization of hypothetical proteins in Leptospira interrogans as adhesins and potential vaccine and diagnostic antigens

Leptospira spp. constitui um grupo de bactérias espiroquetas gram-negativas englobando espécies saprofíticas, intermediárias e patogênicas, sendo as últimas agentes causadores da leptospirose, doença zoonótica de alcance mundial e endêmica em regiões tropicais em desenvolvimento. O crescente número de espécies identificadas de leptospiras destaca ainda mais sua diversidade genética e mecanismos de virulência únicos, muitos deles com função ainda desconhecida. Esforços para o desenvolvimento de novas vacinas com proteção cruzada e efeito duradouro revelaram possíveis candidatos vacinais que necessitam ser adequadamente validados, sendo assim, há ainda uma urgente necessidade de uma vacina universal contra a leptospirose capaz de controlar e reduzir os surtos cada vez mais frequentes da doença. Adesinas são importantes fatores de virulência em diversos patógenos, constituindo antígenos promissores para o desenvolvimento de vacinas contra a leptospirose, assim como para o desenvolvimento de métodos diagnósticos mais rápidos e precisos. Previamente, foram identificadas três proteínas hipotéticas conservadas em L. interrogans pela técnica de phage display, denominadas arbitrariamente como LepA069, LepA962 e LepA388. A expressão do gene codificador da proteína LepA069 apresentou aumento de aproximadamente 70 % em animais infectados por leptospiras virulentas, representando a primeira evidência funcional desta proteína ainda desconhecida. Porções recombinantes da lipoproteína hipotética LepA962 (LepA962_Nt e LepA962_Phg) foram obtidos, sendo demonstrada a forte interação da proteína LepA962_Phg, contendo a sequência identificada por phage display, com laminina, fibronectina plasmática, colágeno I e fibrinogênio de maneira dose-dependente. Adicionalmente, LepA962_Phg apresentou ligação às células VERO e à sua matriz extracelular secretada, e o soro obtido a partir desta proteína recombinante foi capaz de se ligar à superfície de leptospiras virulentas, indicando que LepA962_Phg pode representar um importante domínio de interação entre as leptospiras e seu hospedeiro. Finalmente, a proteína LepA388 pertencente a uma extensa família de proteínas modificadoras de virulência com função desconhecida (DUF_61), presente apenas nas leptospiras patogênicas mais virulentas, apresentou aumento na expressão de seu gene codificador em animais infectados por leptospiras virulentas de acordo com dados na literatura. Além disso, porções recombinantes da região Nterminal desta proteína apresentaram ligação a laminina, colágenos I e IV, vitronectina e fibronectinas plasmática e celular, principalmente considerando a sequência identificada por phage display. Estes dados reforçam as predições de modelos tridimensionais da proteína LepA388 e de outros membros da família DUF_61, as quais identificam domínios semelhantes a toxinas (como abrina e CARDS) responsáveis pela ligação e internalização celulares nos hospedeiros. Dados recentes sugerem um possível papel citotóxico desempenhado pelas proteínas desta família em leptospiras, as quais podem também ser consideradas potenciais candidatas vacinais e para diagnóstico da leptospirose, devido à sua distribuição restrita em espécies e cepas patogênicas de importância para saúde humana.

Leptospira spp. constitutes a group of gram-negative spirochete bacteria comprising saprophytic, intermediate and pathogenic species, the last being causative agents of leptospirosis, a zoonotic disease of worldwide extent and endemic in developing tropical regions. The growing number of identified leptospiral species further highlights their genetic diversity and unique virulence mechanisms, many of them with unknown function. Efforts to develop new vaccines with cross-protection and long-lasting effect have revealed possible vaccine candidates that need to be properly validated. Therefore, there is still an urgent need for a universal vaccine against leptospirosis capable of controlling and reducing the increasing outbreaks of the disease. Adhesins are important virulence factors in several pathogens, constituting promising antigens for the development of vaccines against leptospirosis, as well as for the development of faster and more accurate diagnostic methods. Previously, three conserved hypothetical proteins in L. interrogans were identified by phage display technique, arbitrarily named as LepA069, LepA962 and LepA388. Expression of the LepA069 encoding gene showed an increase of approximately 70 % in animals infected by virulent leptospires, representing the first functional evidence of this still unknown protein. Recombinant portions of the hypothetical lipoprotein LepA962 (LepA962_Nt and LepA962_Phg) were obtained, demonstrating the strong interaction of the LepA962_Phg protein, containing the sequence identified by phage display, with laminin, plasma fibronectin, collagen I and fibrinogen in a dose-dependent manner. Furthermore, LepA962_Phg showed binding to VERO cells and its secreted extracellular matrix, and the serum obtained from this recombinant protein was able to bind to the surface of virulent leptospires, indicating that LepA962_Phg may represent an important domain of interaction between leptospires and its host. Finally, LepA388 protein belonging to an extensive family of virulence modifying proteins with unknown function (DUF_61), present only in the most virulent pathogenic leptospires, showed an increase in the expression of its encoding gene in animals infected by virulent leptospires according to data in literature. Moreover, recombinant portions of the N-terminal region of this protein showed binding to laminin, collagens I and IV, vitronectin and plasma and cell fibronectins, especially considering the sequence identified by phage display. These data support the predictions of three-dimensional models of the LepA388 protein and other members of the DUF_61 family, which identify toxin-like domains (such as abrin and CARDS) responsible for cellular binding and internalization in hosts. Recent data suggest a possible cytotoxic role played by proteins of this family in leptospires, which can also be considered potential vaccine candidates and antigens for diagnosis, due to their restricted distribution in pathogenic species and strains of importance to human health

Efficacy of leptospiral commercial vaccines on the protection against an autochtonous strain recovered in Brazil

Abstract In swine and bovines, leptospirosis prevention and control is carried out via vaccination of susceptible animals using bacterins. However, the efficiency of leptospirosis vaccines has been questioned. This work aimed to investigate the potency of five leptospirosis vaccines sold commercially in Brazil, challenging the animals with one autochthonous strain of Leptospira, Canicola serovar, denoted LO4, isolated from swine. The standard protocol was followed, and renal carriers of Leptospira were identified among the surviving animals by culture and PCR. Of the five vaccines tested, only two proved effective. None of the surviving animals was positive by culture; however, one animal was positive by PCR. Three of the five vaccines sold commercially in Brazil for the immunization of swine or bovines failed the test of the efficacy to protect the vaccinated animals following challenge with an autochthonous Leptospira strain, Canicola serovar. The two vaccines provided protection against the renal carrier state in the surviving animals. The criteria used to produce leptospirosis bacterins sold commercially in Brazil must be reviewed. The industry should support researches on leptospiral vaccinology to improve the quality of the present vaccines and discover new immunogenic strains, because it is known that vaccination is one of the most important tools to increase the reproduction rates in livestock.

Avaliação do padrão sazonal da infecção assintomática por leptospira spp e das formas grave da leptospirose / Evaluation of syndecan-4 expression and its role as biomarkers in chronic chagasic cardiomyopathy

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: A leptospirose é uma zoonose, causada pela bactéria Leptospira, de ampla distribuição e elevado impacto à saúde humana. As epidemias de leptospirose no Brasil acontecem a cada ano em áreas urbanas durante o período de chuvas sazonais. Porém não existem estudos que avaliem se as formas assintomáticas e/ou subclínicas seguem este padrão estacional relacionado a precipitação. O objetivo deste trabalho é determinar a incidência de infecção assintomática e de leptospirose grave durante diferentes períodos de precipitação em Salvador. METODOLOGIA: Realizamos cinco inquéritos sorológicos estacionais em uma coorte com 3176 habitantes na comunidade de Pau da Lima, Salvador – Bahia, para identificar infecções assintomáticas por Leptospira spp (2013-2015)...

INTRODUCTION AND AIM: Introduction and aim: Leptospirosis is a zoonosis caused by Leptospira bacteria, and has a wide distribution with a high impact to human health. Outbreaks of leptospirosis in Brazil occur each year in urban areas during the rainy season. However, there are no studies to assess whether the asymptomatic and/or subclinical follow this seasonal pattern related to precipitation. The aim of this study is to determine the incidence of asymptomatic infection and severe leptospirosis. during different periods of rainfall in Salvador. METHODOLOGY: We conducted five seasonal serosurveys in a cohort of 3176 inhabitants in the community of Pau da Lima, Salvador-Bahia to identify asymptomatic infections by Leptospira (2013-2015)...

Heterogenic colonization patterns by Leptospira interrogans in Rattus norvegicus from urban slums

Abstract We evaluated the renal colonization by Leptospira interrogans in Rattus norvegicus (rats), as it is the major natural reservoir of urban leptospirosis. We caught 72 R. norvegicus, out of which 32 were found to be positive for L. interrogans by immunofluorescence assay. From these rats, we selected 17 and divided them into six groups based on the mass-age/sex. We performed the immunohistochemistry test against L. interrogans in the kidney sections of the rats and systematically counted the colonized tubules (CTs) in 20 fields. The proportion of positive fields varied from 5% to 95%. The number of CTs in 20 fields varied from 0.5 to 85.5. These differences were not related to age or sex of the animals. The characterization of leptospiral colonization patterns in the natural reservoirs is important to better understand the host-pathogen interactions in leptospirosis.

Prevención de leptospirosis humana en la comunidad / Prevention of human leptospirosis in the community

La leptospirosis es endémico-epidémica en Cuba; centenares de casos se han informado desde la década de los 80 hasta la actualidad. Se realizó una revisión de las principales acciones de prevención y control de la leptospirosis en la comunidad y su tratamiento. Se efectuó una búsqueda bibliográfica en las bases de datos MEDLINE, EBSCO y SciELO; se tuvo en cuenta además, la Guía de la Organización Mundial de la Salud para el diagnóstico, vigilancia y control de la leptospirosis humana vigente desde el 2003 y el Programa Nacional de Prevención y Control de la Leptospirosis Humana vigente desde 1997. Se analizan acciones preventivas como: eliminar reservorio de la enfermedad (incluye desratización, saneamiento canino, vacunación animal, detección y tratamiento de animales domésticos portadores y enfermos); evitar la contaminación de medios infectantes (abarca vertimiento sanitario de la excreta animal, drenaje de charcos y terrenos bajos, higienización comunitaria, desinfección del hábitat animal, tratamiento sanitario de piscinas, protección física de fuentes de agua y alimentos); evitar el contagio humano con medios infectantes (implica prohibición sanitaria de ingestión de carnes y leches de animal enfermo o portador, desinfección de frutas y verduras, uso de medios físicos de protección, prohibición sanitaria de inmersión en fluviales contaminadas); quimioprofilaxis y vacunación. Se establecen las principales acciones desarrolladas, tanto por el Ministerio de Salud Pública de Cuba como por la Organización Mundial de la Salud.

Leptospirosis is endemic-epidemic in Cuba. Hundreds of cases have been reported from the 80s to the present. A review of the main actions for prevention and control of leptospirosis in the community and its treatment was performed. A literature search was conducted in MEDLINE, EBSCO and SciELO databases. The World Health Organization Guide for the diagnosis, monitoring and control of human leptospirosis in force since 2003 and the National Program for Prevention and Control of Human Leptospirosis in force since 1997 were taken into account also. Preventive actions are analyzed such as: removing reservoir of this disease (including rodent control, canine sanitation, animal vaccination, screening and treatment of carriers and sick pets); avoiding contamination of infective media (covering health dumping of animal excreta, drainage ponds and lowlands, community sanitation, disinfection of animal habitat, pool-health treatment, physical protection of water sources and food); preventing human infection with infective means (involving ingesting health prohibition of meat and milk from sick animals or carrier, disinfection of fruits and vegetables, using physical means of protection, health ban immersion in contaminated river); chemoprophylaxis and vaccination. The main actions are set by both the Ministry of Public Health of Cuba as the World Health Organization.

Leptospira interrogans sorovar Copenhageni e Icterohaemorrhagiae: relação evolutiva, diferenças genéticas e associação com desfecho clínico / Leptospira interrogans serovar Copenhageni and Icterohaemorrhagiae: evolutionary relationship, genetic differences and association with clinical outcome

A leptospirose é a zoonose mais disseminada mundialmente por infectar diversas espécies diferentes de animais mamíferos. Apresenta 22 espécies identificadas, sendo dez patogênicas, cinco intermediarias e sete saprofiticas, além de apresentar mais de 250 sorovares diferentes. Em Salvador, Leptospira interrogans sorovar Copenhageni é a causadora da epidemia urbana na cidade e apresenta ratos como seu hospedeiro reservatório. As formas clínicas da leptospirose podem variar de assintomática a formas graves. As manifestações clínicas mais graves envolve o desenvolvimento da síndrome Hemorrágica pulmonar severa, e óbito do paciente. Estudos para entender as diferenças genéticas entre as diferentes espécies e sorovares é de extrema importância para identificar fatores de virulência da bactéria, genes que possam está associado aos diferentes formas clinicas, e sua capacidade de se adaptar aos diferentes ambientes. Neste trabalho foi estudado o genoma de dois importantes serovares de L. interrogans, o sorovar Copenhageni e o serovar Icterohaemorrhagiae, e suas diferenças genéticas e associação com dados clínicos e epidemiológicos. Um total de 141 isolados...

There are 22 different species of Leptospira spp. in which 10 are pathogenic, 5 intermediate and 7 saprophytic species. In Salvador the Leptospira interrogans sorovar Copenhageni is the main serovar detected, responsible for the urban epidemics, and has rats as their main host. The clinical manifestations of leptospirosis can vary from asymptomatic form to severe disease like pulmonary hemorrhagic syndrome, and death. Studies to understand de genetic differences among the species and serovars are of great importance to identify virulence factors, genes that could be related to the different clinical manifestations and its capacity to adapt in different environments. Here, the genome of two epidemiologically important serovar of the L. interrogans, the serovar Copenhageni and serovar Icterohaemorrhagiae, and their genetic differences and the association of these differences with epidemiological and clinical data were studied. A total of 141 strains...

Caracterização das leptospiras isoladas dos pacientes atendidos no Hospital Couto Maia / Characterization of isolated leptospires of patients seen in the hospital Couto Maia

A leptospirose é uma zoonose de distribuição mundial, com 1,2 milhões de casos registrados a cada ano. De 1996 a 2013, o grupo de pesquisa de leptospirose do CPqGM, realiza uma vigilância ativa no Hospital Couto Maia em Salvador-Ba, onde foi recrutado 4612 casos suspeitos para leptospirose. Destes 4612 foi confirmado o diagnóstico de 1853 (40%) utilizando pelo menos um dos três métodos de diagnóstico (MAT, Hemocultura, qPCR). Dentre os casos confirmados, 1759 (95%) foram confirmados pelo MAT. A sensibilidade do MAT foi diferente entre as amostras aguda e convalescente, sendo 60% na fase aguda e 97% na fase convalescente. O sorogrupo Icterohaemorrhagiae foi o mais prevalente (90%) dos casos confirmados para MAT. Durante o período do estudo foram coletadas 1133 hemoculturas e destas 203 (18%) foram positivas, sendo possível isolar leptospiras de 93/203 (45%) das hemoculturas, as quais foram soro-agrupadas com soros heterológos de coelho. A concordância entre o sorogrupo encontrado no MAT e na soro-agrupagem foi de 80%. Os achados mostram que existe uma concordância significante entre o sorogrupo encontrado pelos dois métodos, o que indica que o painel de cepas utilizado no MAT apresenta uma ótima cobertura para os sorogrupos prevalentes na região. A predominância de um sorogrupo facilitou quanto a tomadas de decisões para prevenção e controle, assim como facilita para o desenvolvimento de novos testes de diagnóstico e vacinas mais direcionados.

Leptospirosis is a re-emerging zoonotic disease of global importance, with 1,2 million cases reported each year. Diagnosis of leptospirosis is often difficult given the nonspecific disease presentation. In order to compare the performance of the two gold standard diagnostic tests for leptospirosis, the group enrolled 4612 patients with suspected leptospirosis during active surveillance at the state infectious disease reference hospital, Hospital Couto Maia, in Salvador, Bahia between 1996 and 2013. Of these, was confirmed Leptospira infection in 1853 (40%) using at least one of three diagnostic methods (microagglutination (MAT), blood culture, and qPCR). Was confirmed 1759 (95%) cases using only the MAT assay, and identified the serogroup Icterohaemorrhagiae as the infective agent in 90% of MAT positive samples. It was determined the sensitivity of the MAT was 60% for acute phase samples and increased to 97% for convalescent samples. Within this study period, it was possible to collect 1133 blood cultures and was isolated leptospires from 93 of 203 (45%) of blood cultures, and determined the serotype using heterologous rabbit sera. The concordance between the infective serogroup identified using hemoculture and MAT techniques was 80%. This result indicates that the panel of 11 strains used in the MAT represents a majority of the infective serogroups causing disease in our study population. The predominance of a single serogroup in symptomatic cases informs the development of new diagnostic tests and novel vaccines to prevent leptospirosis in Brazil.

Identificação de biofilme renal em ratos naturalmente infectados por Leptospira interrogans através de técnicas histoquímicas e de microscopia eletrônica de varredura, Brasil / Identification of renal biofilm in rats naturally infected with Leptospira interrogans using histochemical and scanning electron microscopy techniques, Brazil

INTRODUÇÃO: A leptospirose é um importante agravo de saúde pública e afeta ao menos um milhão de humanos por ano no mundo. Ratos de esgoto (Rattus norvegicus) são os principais reservatórios de leptospiras patogênicas nas áreas urbanas e excretam, através da urina, elevadas quantidades de bactérias diariamente. As leptospiras sobrevivem no ambiente e são transmitidas para novos hospedeiros através do contato com mucosas e pele. Leptospiras patogênicas formam densos biofilmes in vitro. A patogênese da leptospirose em reservatórios crônicos é pouco conhecida. OBJETIVO: Estudar a formação de biofilme por Leptospira interrogans em R. norvegicus capturados em uma área hiperendêmica de Salvador, Bahia, Brasil. MATERIAIS E MÉTODOS: Capturamos 86 ratos, dos quais 76 (88,4%) foram considerados portadores de L. interrogans através da avaliação por imunohistoquímica (IHQ) anti-L. interrogans e/ou Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa em Tempo Real (RT-qPCR) utilizando iniciadores específicos para o gene lipL32. RESULTADOS: Ao exame de IHQ anti-L. interrogans, 69 ratos foram positivos. Destes, 24 (35%)...

INTRODUCTION: Leptospirosis is an important public health problem and affects at least one million people each year worldwide. Norway rats (Rattus norvegicus) are the main reservoir hosts of leptospires in urban environments. They excrete large amounts of bacteria daily. Leptospires survive in the environment and are transmitted to new hosts by contact with mucous membranes and skin. Pathogenic leptospires form dense biofilms in vitro. The pathogenesis of chronic leptospirosis in reservoirs is largely unknown. The aim of this work was to study biofilm formation by Leptospira interrogans in R. norvegicus caught in a hyperendemic area in Salvador, Bahia, Brazil. MATERIAL AND METHODS: We caught 86 rats, out of which 76 (88.4%) were carriers of L. interrogans according to immunohistochemistry (IHC) anti-L. interrogans and/or quantitative real time PCR (RT-qPCR) using LipL32 primers. RESULTS: From the 69 rats positive for IHC anti-L. interrogans, 24 (35%)...

Leptospira spp. infection in sheep herds in southeast Brazil

With the aim of studying Leptospira spp. infection in sheep herds, blood samples and respective kidney and liver fragments were collected from 100 animals from twenty different properties during slaughter at a meat company in the Sorocaba region, São Paulo state, southeast Brazil. The microscopic agglutination test (MAT) was performed with 29 strains of Leptospira spp. To identify the agent in the liver and kidney, 100 samples of each tissue were submitted to culture in Fletcher medium and analyzed by the polymerase chain reaction (PCR) for Leptospira spp.

Leptospira spp. infection in sheep herds in southeast Brazil

With the aim of studying Leptospira spp. infection in sheep herds, blood samples and respective kidney and liver fragments were collected from 100 animals from twenty different properties during slaughter at a meat company in the Sorocaba region, São Paulo state, southeast Brazil. The microscopic agglutination test (MAT) was performed with 29 strains of Leptospira spp. To identify the agent in the liver and kidney, 100 samples of each tissue were submitted to culture in Fletcher medium and analyzed by the polymerase chain reaction (PCR) for Leptospira spp.

Avanços no conhecimento da imunopatogênese da leptospirose e a aplicação do método do imprint como ferramenta qualitativa e quantitativa de leptospiras / Advances in understanding the immunopathogenesis of leptospirosis and application of the imprint method as a qualitative and quantitative tool leptospires

A leptospirose é uma zoonose causada por espiroquetas patogênicas pertencentes ao gênero Leptospira. O modelo da doença em camundongos tem vantagens devido à ampla gama de ferramentas genéticas e imunológicas disponíveis para pesquisas básicas. A maior limitação na conduta clínica e na pesquisa experimental da leptospirose é o fraco desempenho dos métodos disponíveis para detecção direta e para quantificação de leptospiras. Foi incluído nesta tese um conjunto de três manuscritos que visam investigar o desfecho da infecção pela cepa virulenta de Leptospira interrogans nas linhagens de camundongos selvagens (A, CBA, BALB/c e C57BL/6)...

Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochaetes belonging to the genus Leptospira. The mouse disease model is advantagous due to the broad array of immunological and genetic tools available for basic research. A major limitation in the clinical management and experimental research of leptospirosis is the poor performance of the available methods in the direct detection and quantification of leptospires. This thesis includes three manuscripts that investigate the outcome of infection by a virulent strain of Leptospira interrogans in wildtype mice strains: A, CBA, BALB/c and C57BL/6; in iNOS knockout (KO) mice, recombination activating gene 1 (RAG1) KO mice and CB17 severe combined immunodeficiency (SCID) mice. To investigate whether the imprint method (IM) of quantification was reliable we compared it with against real time PCR (qPCR) for the detection and quantification of leptospires in kidney samples from rats and hamsters. As expected, none of the wildtype mice were susceptible to lethal leptospirosis. The A and C57BL/6 strains exhibited high leptospiral loads in the kidney samples and the CBA and C57BL/6...

Avaliação ambiental e do gradiente social nas infecções por leptospira em uma comunidade de Salvador-Bahia / Environmental and social gradient on leptospira infection in a community assessment of Salvador-Bahia

Introdução: A leptospirose tem emergido como um importante problema de saúde pública no mundo. Esta zoonose é responsável por epidemias anuais que acometem principalmente indivíduos residentes em comunidades negligenciadas como as existentes em Salvador. Poucos estudos longitudinais foram realizados com objetivo de identificar os fatores de risco para infecção, fontes de transmissão e compreender a real dimensão da leptospirose nessas comunidades. Objetivo: Identificar fatores de risco para infecção prévia e novas infecções por leptospiras no contexto ambiental e socioeconômico em uma comunidade em Salvador Bahia. Métodos: Estudos de soroprevalência e coorte foram conduzidos na comunidade de Pau da Lima, com a realização de entrevistas domiciliares, avaliação peridomiciliar, coleta de material biológico e análises espaciais para mensurar a associação epidemiológica entre fatores de risco ambientais e as infecções. O teste de microaglutinação foi utilizado para avaliar amostras sorológicas obtidas. Resultados: Residir próximo aos esgotos abertos e do fundo do vale proximidade do domicílio a acúmulo de lixo e baixa renda foram associados com as infecções. A incidência anual de infecções secundárias foi de 2,3 vezes maior que as infecções primárias. Conclusão: O presente estudo sugere que medidas preventivas devem focalizar nas deficiências de infraestrutura que servem como fontes de transmissão. Intervenções mais efetivas precisam se concentrar especialmente nos adultos jovens e nos grupos populacionais mais desfavorecidos nestas comunidades.

Introduction: Leptospirosis has emerged as an important public health problem in the world. This zoonosis is responsible for annual epidemics affecting mainly individuals living in disadvantaged communities as existing in Salvador. Few longitudinal studies have been conducted in order to identify risk factors for infection, transmission sources and understand the real dimension of leptospirosis in these communities. Objective: To identify risk factors for early infection and new infections by Leptospira in environmental and socioeconomic context in a community in Salvador Bahia. Methods: Seroprevalence and cohort studies were conducted in Pau da Lima community, conducting home interviews peridomicilary review, collection of biological material and spatial analysis to measure the epidemiological association between environmental risk factors and infections. The agglutination test was used to evaluate serum samples obtained. Results: Residing next to open sewers and the valley floor near the homes of waste accumulation and low income were associated with infections. The annual incidence of secondary infections was 2.3 times higher than primary infections. Conclusion: This study suggests that preventive measures should focus on infrastructure deficiencies that serve as sources of transmission. More effective interventions need to focus especially on young adults and the most disadvantaged population groups in these communities.

O uso da talidomida como terapia adjuvante na leptospirose experimental / The use of thalidomide as adjuvant therapy in experimental leptospirosis

A leptospirose é uma zoonose de importância global, causada por leptospiras patogênicas. Seu tratamento é limitado quando iniciado após quatro dias do surgimento de sintomas, portanto, novas terapias adjuvantes são necessárias. Objetivo. Testar a droga imunomoduladora talidomida como terapia adjuvante à ampicilina no modelo de tratamento tardio da leptospirose experimental em hamsters. Métodos. 60 hamsters foram infectados via intraperitoneal por Leptospirainterrogans cepa L1-130, e foram separados em grupos: nenhum tratamento (NONE), talidomida (TAL), ampicilina (AMP) e ambos (AMP-TAL)...

Leptospirosis is a zoonosis of global importance, caused by pathogenic leptospira. His treatment is limited when started after four days of onset of symptoms, increasing the risk of morbidity and mortality, so new adjuvant therapies are needed.Objectives.To test the immunomodulatory drug, thalidomide, as an adjuvant therapy to antibiotics in experimental leptospirosis. Methods. Hamsters were infected by Leptospirainterrogans strain L1-130, and groups were assigned based on no treatment (NONE), thalidomide only (TAL), ampicillin only (AMP) or both (AMP-TAL). Thalidomide was administered via a gastric tube: 50 mg/kg in linseed oil and 2 ml/kg for three days. Ampicillin was administered intramuscularly at the rate of 100 mg/kg/bid for six days. Treatment was started two days after the onset of symptoms (experiment 1) and immediately after detection of the first death (experiment 2). Results. Experiment 1: all hamsters from the groups AMP and AMP-TAL...

História natural da leptospirose urbana: influência do sexo e da idade no risco de infecção, progressão clínica da doença e óbito / Natural history of urban leptospirosis: influence of gender and age on the risk of infection, clinical disease progression and death

Leptospirose é causada por bactérias do gênero Leptospira e é transmitida aos humanos pela urina de animais contaminados. Apenas uma parcela dos indivíduos infectados desenvolvem manifestações clínicas graves que requerem hospitalização e são potencialmente fatais. Os fatores que determinam que uma infecção por Leptospira evolua de forma autolimitada e outra progrida para uma doença grave e fatal ainda são pouco claros. Nós hipotetizamos que características demográficas como o sexo e a idade influenciem o risco de progressão clínica de indivíduos infectados pela Leptospira. OBJETIVO Investigar a influência do sexo e da idade no risco de progressão clínica da leptospirose após a infecção e estimar a razão entre o número de infecções subclínicas para cada caso grave e cada óbito por leptospirose em comunidades com alta transmissão da doença. MÉTODO Um estudo de coorte foi conduzido entre 2003 e 2006 para determinar a incidência de infecções subclínicas por Leptospira no bairro de Pau da Lima, uma comunidade carente de Salvador - BA . Paralelamente, pacientes com leptospirose grave e óbitos por leptospirose foram identificados através de vigilância populacional ativa no Hospital Couto Maia, em Salvador. Foi calculada a incidência de leptospirose grave e a mortalidade por leptospirose para áreas da cidade com características socioeconômicas similares a da área do estudo de coorte. Todas as incidências foram estratificadas por faixa etária e sexo, sendo em seguida comparadas através de razões de risco. RESULTADOS Foi identificada uma incidência média anual de 23,8 (IC 95%, 19,7 – 28,8) casos de infecção subclínica/1.000 habitantes na área da coorte. Em habitantes de áreas da cidade com características socioeconômicas similares a da área do estudo de coorte a incidência média anual de formas graves foi de 8,2 (IC 95%, 7,0 – 9,4) casos/100.000, sendo que a mortalidade por leptospirose média anual nesta população foi de 1,6 (IC 95%, 1,2 – 2,0) óbitos/100.000 habitantes. Homens apresentaram um risco 2,0 (IC 95%, 1,6 – 2,6) vezes maior de desenvolverem infecções subclínicas, 6,1 (IC 95%, 5,2 – 7,2) vezes maior de desenvolverem infecções graves e 0,6 (IC 95%, 0,4 – 1,0) vezes menor de evoluir para óbito do que mulheres. Indivíduos da faixa etária de 25 a 34 anos e de 35 a 44 anos de idade apresentaram um risco de desenvolverem infecções subclínicas 2,5 (IC 95%, 1,8 – 3,6) e 1,3 (IC 95%, 0,8 – 2,3) vezes maior, respectivamente, em comparação aos com idade entre 5 a 14 anos, enquanto que os indivíduos das mesmas faixas etárias apresentaram riscos de leptospirose grave de 4,5 (IC 95%, 2,2 – 9,0) e 5,1 (IC 95%, 2,5 – 10,3) vezes, respectivamente. Estima-se que ocorreram 289 e 1.510 infecções subclínicas para cada caso grave e para cada óbito, respectivamente, identificados e analisados neste estudo. CONCLUSÕES O sexo e a idade influenciam de risco de infecção subclínica, grave e de óbito por leptospirose. Homens tem maior risco de infecção subclínica e grave, entretanto mulheres apresentam maior letalidade de leptospirose. O risco para infecções subclínicas alcança o pico em indivíduos de 25 a 34 anos, entretanto o risco para infecções graves e óbito não se comporta da mesma maneira e aumenta com a idade.

Prolonged jaundice attributed to super infection of hepatitis E virus in a case of resolving leptospirosis.

India is endemic for both Leptospira and hepatitis E virus (HEV). The clinical presentations of these diseases have overlapping features. We report a case of superinfection of HEV in a patient with resolving leptospirosis with underlying Hodgkin lymphoma. The diagnosis of HEV in our case was established by HEV-RNA PCR as our patient was immunosuppressed. The present study highlights the need for molecular diagnosis in the case of HEV infection with strong clinical suspicion and negative serological results.

Fatores de risco para leptospirose como doença ocupacional em surto no interior do Ceará: estudo de caso controle / Risk factors for leptospirosis an outbreak as an occupational disease in Ceará: case-control study

Atualmente, no Brasil, 28 por cento dos casos notificados de leptospirose estão relacionados a áreas rurais. Nessas áreas, a transmissão da leptospirose ocorre de forma indireta, normalmente, ligada ao processo de trabalho das pessoas que lidam com produção de grãos e cereais. Em 2008 no município de Várzea Alegre, CE ocorreu um surto de leptospirose em agricultores envolvidos com o cultivo de arroz. Na ocasião foi desenvolvido um estudo seccional no qual foram levantadas algumas hipóteses e dentre elas que o adoecimento por leptospirose ocorreu devido à atividade laboral desenvolvida pelos trabalhadores na lavoura de arroz. O objetivo deste trabalho foi identificar fatores de risco para o adoecimento por leptospirose, relacionados à atividade laboral, em surto do município de Várzea Alegre a partir de um estudo de caso controle (1:2) de base populacional do período de janeiro a julho de 2008. Considerou-se caso confirmado de leptospirose o indivíduo que apresentou titulação de anticorpos para leptospirose maior ou igual a 1:100 pelo método da soroaglutinação microscópica e controle o indivíduo sadio com resultado laboratorial negativo para anticorpos para leptospirose pelo mesmo método. Foram desenvolvidas análises bi e multivariadas. Dois modelos teóricos foram elaborados e avaliados. No primeiro modelo teórico, os fatores de risco associados foram ser do sexo masculino e ter trabalhado na lavoura do arroz. Sendo assim, para identificar quais os fatores de risco, intrinsicamente, ligados a lavoura do arroz puderam estar relacionados ao desfecho, decidiu-se por realizar um segundo modelo entre os casos que relataram ter trabalhado na lavoura...

Clinical and hematological aspects of dogs naturally infected with Ehrlichia spp. and Leptospira interrogans / Aspectos clínicos e hematológicos de cães naturalmente infectados com Ehrlichia spp. e Leptospira interrogans

Ehrlichiosis and leptospirosis are frequent diseases in tropical countries, although they are not always considered as differential diagnosis. The purpose of this work was to evaluate clinical signs and hematological alterations in dogs reactive to leptospirosis, among them those that presented morulae of Ehrlichia spp. in peripheral blood, and to recognize the frequency of Leptospira serovars by means of the microscopic agglutination test. Blood samples were used from 50 dogs presenting morulae of Ehrlichia spp. in blood extensions collected from the ear marginal capillaries. The clinical signs frequently observed were apathy (100.00%), anorexia/dysorexia (100.00%), adypsia (83.33%), ocular secretion (66.66%), reactive lymph nodes (66.66%), diarrhea (58.33%), vomiting, anemia and fever (41.66%). Albeit unspecific, anemia and thrombocytopenia are frequent hematological findings in canine ehrlichiosis and are present in both diseases. Of the 50 dogs with ehrlichiosis, 12 (24.00%) were reactive to leptospirosis, and the most frequent serovars were Pomona (33.33%), followed by Canicola (27.77%) and Icterohaemorrhagiae (22.22%). The results suggest the need to establish a differential diagnosis between these diseases that may occur concomitantly.

Erliquiose e leptospirose são doenças frequentes em países tropicais, embora nem sempre seja feito o diagnóstico diferencial entre estas. Objetivou-se avaliar os sinais clínicos e as alterações hematológicas em cães reagentes para leptospirose, dentre aqueles que apresentaram mórula de Ehrlichia spp. e reconhecer a frequência dos sorovares de Leptospira, por meio do teste de aglutinação microscópica. Foram utilizadas amostras sanguíneas de 50 cães que apresentavam mórulas de Ehrlichia spp. em extensões de sangue coletadas dos capilares marginais da orelha. Os sinais clínicos frequentemente observados foram apatia (100,00%), anorexia/disorexia (100,00%), adipsia (83,33%), secreção ocular (66,66%), linfonodos reativos (66,66%), diarréia (58,33%), vômito, anemia e febre (41,66%). Embora inespecíficos, anemia e trombocitopenia são achados hematológicos frequentes na erliquiose canina e presente em ambas as doenças. Dos 50 cães com erliquiose, 12 (24,00%) apresentaram-se reagentes para leptospirose, sendo os sorovares mais frequentes: Pomona (33,33%) seguido pelo Canicola (27,77%) e Icterohaemorrhagiae (22,22%). Os resultados sugerem a necessidade de se estabelecer um diagnóstico diferencial entre estas doenças que podem ocorrer concomitantemente.

Ovine leptospirosis in Brazil

Leptospirosis is a zoonosis distributed worldwide, endemic mainly in humid subtropical and tropical countries, with epidemic potential. It affects a range of both wild and domestic animals, including sheep, which transport leptospires in their urine and, therefore, can infect other animals and humans who deal with them. Therefore, leptospirosis is characterized as an occupational zoonosis. In individual herds leptospirosis can cause severe economic loss due to miscarriages and outbreaks of mastitis with a significant reduction of milk production. The disease is caused by Leptospira interrogans, which was reclassified into 13 pathogenic species, and distributed into more than 260 serovars classified into 23 serogroups. The clinical signs of infection may vary depending on the serovar and host. In maintenance hosts, antibody production is generally low; there are relatively mild signs of the disease, and a prolonged carrier state with organisms in the kidneys. In incidental hosts, the disease may be more severe, with high titers of circulating antibodies and a very short or nonexistent renal carrier state. In general, young animals with renal and hepatic failure have more serious infections than adults. Several diseases may produce symptoms similar to those of leptospirosis, so that laboratory confirmation, through microscopic agglutination test, for example, is required. The effectiveness of treatment depends on early diagnosis and appropriate therapy, depending on clinical features, since leptospirosis can develop into chronic liver disease and nephropathy, progressing towards death. Improvements in habitation and sanitary conditions, rodent control, vaccination, isolation and treatment of affected animals are the main measures for the control of leptospirosis.

Diagnóstico sorológico da leptospirose: benefício de amostra aguda tardia na confirmação de casos / Serological diagnosis of leptospirosis sample late acute benefit in confirming cases

A confirmação da leptospirose utilizando o Teste de Aglutinação Microscópica (MAT) requer amostras da fase aguda e convalescente para identificar soroconversão ou aumento de quatro vezes nos títulos. A Organização Mundial de Saúde (OMS) recomenda que a coleta da amostra convalescente seja realizada ≥14 dias após a coleta da amostra aguda. No entanto, a dificuldade na coleta de amostras convalescentes impede a confirmação dos casos e é uma das principais causas para sub-notificação da leptospirose. Este estudo investigou a viabilidade da coleta de uma amostra de soro aguda tardia de casos internados com leptospirose e avaliou se a análise sorológica desta amostra pode melhorar a eficiência do protocolo de confirmação diagnóstica de leptospirose. De 2003 a 2009, uma vigilância hospitalar ativa em Salvador-Brasil, identificou prospectivamente pacientes hospitalizados com suspeita clínica da leptospirose. Três amostras de sangue foram coletadas para cada caso: uma amostra aguda precoce, uma amostra aguda tardia e uma amostra convalescente, coletadas respectivamente nas primeiras 24 horas após hospitalização, e 4 e ≥14 dias depois da coleta da primeira amostra. Os pacientes identificados tiveram o diagnóstico de leptospirose confirmado por soroconversão, aumento de quatro vezes de títulos, ou título único ≥1:800 no MAT. O desempenho diagnóstico do MAT e do ELISA IgM na avaliação combinada das amostras aguda precoce e aguda tardia foi comparado ao desempenho da avaliação das amostras aguda precoce e convalescente que segue a recomendação de testagem da OMS. Nós confirmamos 643 (68%) dos 938 casos suspeitos. A coleta de amostra convalescente foi possível para 63% dos pacientes confirmados, e 55% dos pacientes suspeitos. Em contraste, a amostra da fase aguda tardia foi coletada para 77% e 66% dos pacientes confirmados e suspeitos, respectivamente. Para os 302 casos confirmados que tiveram as três amostras de soro coletadas, a sensibilidade do MAT e do IgM-ELISA na análise das amostras aguda precoce e tardia foi de 97% (IC95%, 94-99%) e 96% (93-98%), respectivamente, em comparação aos resultados da análise das amostras aguda precoce e convalescente. Em contraste, considerando apenas as amostras agudas destes 302 pacientes, a sensibilidade do MAT e do IgM-ELISA foi de 44% (38-50%) e 75% (69-79%), respectivamente. Amostra aguda tardia e convalescente foi obtida dos casos suspeitos de leptospirose que evoluíram para óbito de 32% e 6%, respectivamente. Os resultados indicam que a coleta e o teste sorológico da amostra aguda tardia de pacientes hospitalizados por leptospirose é viável e melhora a eficiência dos atuais protocolos de confirmação laboratorial de casos de leptospirose.

Aspectos epidemiológicos da leptospirose no Brasil, 2000 a 2009 e a avaliação do conhecimento e das atitudes sobre a doença em uma favela na cidade de Salvador, Bahia / Epidemiological aspects of leptospirosis in Brazil, from 2000 to 2009 and evaluation of knowledge and attitudes about the disease in a slum in the city of Salvador, Bahia

A leptospirose é a principal doença infecciosa zoonótica em áreas urbanas nos países em desenvolvimento, porém subnotificada. O conhecimento e as atitudes sobre a leptospirose é desconhecida nas comunidades brasileiras onde a doença é prevalente. Objetivos: 1) Descrever os casos notificados de leptospirose, fatores de risco para óbito, influência das chuvas em cidades metropolitanas e parte da carga da leptospirose no Brasil, 2000-2009. 2) Descrever o conhecimento e as atitudes sobre leptospirose dos moradores de uma favela na cidade de Salvador. Métodos:1) Foram descritos os casos notificados de leptospirose no Sistema Nacional de Vigilância de 2000 a 2009. Foi analisada a influência das chuvas e a ocorrência de casos de leptospirose em cinco metrópoles brasileiras. Foram calculadas as taxas de incidência, hospitalização, mortalidade e letalidade por leptospirose e foram avaliados os fatores de risco para óbito a partir das variáveis demográficas entre os casos confirmados. 2) Foi conduzido um estudo transversal sobre o conhecimento e atitudes sobre leptospirose na comunidade de Pau da Lima, Salvador – Bahia. Resultados: 1) A doença acomete populações vulneráveis socialmente que vivem em áreas urbanas. As taxas de incidência, hospitalização, mortalidade e letalidade foram 1,48, 1.04, 0,12 por 100.000 habitantes e 9%, respectivamente. A partir de 15 anos de idade (OR=1,88; IC95% 1,39-2,55), baixo nível educacional (OR=1,35; IC95% 1,17-1,56), viver em área urbana (OR=2,19; IC95% 1,80-2,69) foram detectados como fatores de risco para óbito entre os casos confirmados. As chuvas tiveram forte relação com a ocorrência de surtos sazonais da doença em cinco cidades metropolitanas. 2) 72,7% das pessoas sabem que a leptospirose é uma doença transmitida por ratos, 56,4% reconhecem que pegam a doença com o contato com urina de ratos, 17,8% referiram limpar esgotos ao redor da sua casa, 35,5% referiram usar luvas e 33,3% botas para se proteger. Conclusão: No Brasil, a doença acomete homens adultos, com baixa nível educacional que vivem em áreas urbanas, tais achados estão associados a óbitos. Muitos surtos sazonais ocorreram sob influência das chuvas nas cidades metropolitanas estudadas. Na comunidade de Pau da Lima, uma favela de Salvador, as pessoas conhecem a leptospirose e as principais atitudes detectadas estão relacionadas as contínuas exposições a água de chuvas e esgotos na comunidade. As conclusões deste trabalho apontam para a necessidade de estruturar serviços de saúde que antecedam as chuvas, e para obras de saneamento básico em regiões metropolitanas com maior incidência da doença. Recomendamos que sejam realizados outros estudos sobre o conhecimento em relação a leptospirose para entender os déficits de informação da população, assim como instruí-los para organizadamente cobrarem soluções como obras de saneamento básico que minimizem o impacto da leptospirose na população.